> Blog > Novinky z oboru

Jaké jsou funkce soupravy ELISA?

2022-12-23

ELISA kit je založen na pevné fázi antigenu nebo protilátky a enzymatickém značení antigenu nebo protilátky. Antigen nebo protilátka navázaná na povrch pevného nosiče si stále zachovává svou imunologickou aktivitu a enzymem značený antigen nebo protilátka si zachovává jak svou imunologickou aktivitu, tak aktivitu enzymu. V době stanovení reaguje testovaný vzorek (ve kterém se měří protilátka nebo antigen) s antigenem nebo protilátkou na povrchu pevného nosiče. Komplex antigen-protilátka vytvořený na pevném nosiči je oddělen od ostatních látek v kapalině promytím.

Přidávají se enzymaticky značené antigeny nebo protilátky, které se také reakcí vážou na pevný nosič. V tomto okamžiku je množství enzymu v pevné fázi úměrné množství látky ve vzorku. Po přidání substrátu enzymové reakce je substrát katalyzován enzymem za vzniku barevných produktů. Množství produktu přímo souvisí s množstvím testované látky ve vzorku, takže kvalitativní nebo kvantitativní analýza může být provedena podle hloubky barvy.

Vysoká katalytická účinnost enzymů nepřímo zesiluje výsledky imunitní odpovědi, díky čemuž je test vysoce citlivý. ELISA může být použita ke stanovení antigenů, ale také může být použita ke stanovení protilátek.

Základní principy soupravy ELISA
Využívá specifickou reakci antigenu a protilátky k připojení předmětu k enzymu a poté vytváří barevnou reakci mezi enzymem a substrátem pro kvantitativní stanovení. Předmětem měření může být protilátka nebo antigen.

Pro tento způsob stanovení jsou nezbytná tři činidla:
â Antigen nebo protilátka v pevné fázi (imunitní adsorbent)
â¡ Enzymově značený antigen nebo protilátka (marker)
â¢ substrát pro působení enzymů (činidlo vyvolávající barvu)

Při měření se nejprve antigen (protilátka) naváže na pevný nosič, ale stále si zachovává svoji imunitní aktivitu a poté se přidá konjugát (marker) protilátky (antigenu) a enzymu, který si stále zachovává svou původní imunitní aktivitu a enzym. aktivita. Když konjugát reaguje s antigenem (protilátkou) na pevném nosiči, přidá se odpovídající substrát enzymu. Tedy katalytická hydrolýza neboli REDOXNÍ reakce a barva.

Odstín barvy, který produkuje, je úměrný množství měřeného antigenu (protilátky). Tento barevný produkt lze pozorovat pouhým okem, optickým mikroskopem, elektronovým mikroskopem, lze také měřit spektrofotometrem (přístroj pro značení enzymů). Metoda je jednoduchá, pohodlná, rychlá a specifická.

Předchozí:Představení Elisa Plate

další:Proč buněčná kultura nejprve lýzuje červené krvinky?